常见问题解答

前两期和科研宝子们分享了co-IP实验和GST-Pull down实验，这一期小编带大家了解另一种常见的互作实验——SPR。表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）技术凭借其无标记、实时监控、高灵敏度等特点，在过去数十年里迅速崛起，成为探究蛋白质、核酸、小分子药物等生物大分子相互作用的强大工具。

上一期和科研宝子们分享了co-IP实验，这一期小编带大家了解另一种常见的互作实验——GST pull-down。Pull-Down主要用于体外验证已知蛋白间的直接相互作用，通过重组加GST标签的蛋白与靶蛋白的结合，非生理状态下的测试可能影响蛋白结构。其优点在于实验流程简单，利用高效商业化载体和GSH琼脂糖珠，难度较低。相比之下，Co-IP反映的是体内或细胞水平上的真实蛋白互作，保持了活细胞环境下蛋白间的自然互动，但无法明确区分直接或间接作用。实验复杂度高，需要高质量抗体和非变性条件，整体操作较为困难。两者互补，GST Pull-Down初筛直接互作，Co-IP确认体内情境，共同描绘蛋白互作全貌。

深入理解蛋白质相互作用对于揭示生物体内的分子机制至关重要。今天小编带大家了解最常见的蛋白质相互作用实验技术之一——免疫共沉淀。免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）主要用于检测和研究蛋白质-蛋白质相互作用。它基于抗体对特定抗原的特异性识别，能够从复杂的细胞或组织提取物中富集目标蛋白及其结合伙伴，进而分析蛋白质复合体的组成。这种方法的独特之处在于能够在接近生理条件的状态下，捕捉和证实蛋白质之间的交互作用，因此被视为探究蛋白质复合体构成及动态变化的重要工具。相比于其他的分子间相互作用鉴定技术，如GST pull-down等，免疫共沉淀可以在生理条件下检测，具有高特异性和灵活性。

蛋白质磷酸化作为细胞内最重要的翻译后修饰（PTM）之一，调控着几乎所有的细胞活动，包括信号传导、代谢、基因表达、细胞周期进程和凋亡等。自20世纪50年代初由Edward Adelberg发现以来，已经成为生物学领域中备受瞩目的研究焦点。它的动态变化直接影响着细胞的功能状态和响应环境的能力。今天小编就带大家探讨一下蛋白质磷酸化的基础理论，以及当前流行的检测技术。

流式细胞术（Flow Cytometry, FC）是一种以流式细胞仪为检测手段，在悬浮液中快速分析和分类单个细胞或细胞结构，并加以定量的技术。结合了光学和电子测量手段，通过对细胞进行荧光染色，实现了对细胞特征，如大小、形状和荧光信号的即时量化。流式细胞术还可以结合细胞分选仪通过荧光激活细胞分选（Fluorescence Activated Cell Sorting, FACS）精准的从群体种分离特定类型的细胞或细胞器，极大地推动了细胞生物学、免疫学以及临床诊断等多个领域的进步。

流式细胞术是一种强大的技术，能够通过FSC（前向散射）和SSC（侧向散射）图表对细胞大小和内部结构进行分类。本文详细介绍了如何通过FSC与SSC散点图区分中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞，并探讨了该技术在免疫学和临床应用中的重要性。

流式细胞术中，抗体的非特异性结合是影响实验精度的重要问题，特别是由于Fc受体（FcR, Fragment Crystallizable Receptor）的存在。抗体由Fab段和Fc段组成，其中Fab段负责与目标分子特异性结合，而Fc段则与效应分子或细胞相互作用（见Fig 1）。FcR是免疫调节系统中的重要受体，主要表达在先天免疫细胞（Innate Immune Cells）表面，如巨噬细胞（Macrophages）、单核细胞（Monocytes）、中性粒细胞（Neutrophils）、树突状细胞（Dendritic Cells）等。FcR能够识别并结合抗体的Fc段，从而引发免疫应答。在实验中，这种识别可能导致抗体的Fc段与细胞表面的FcR发生非特异性结合，进而产生背景噪音，甚至是假阳性信号。

流式细胞术的高通量性和多参数分析使其在免疫学研究中具有广泛应用。通过同时检测多个标记物，研究人员可以更全面地了解免疫细胞群体的组成和状态。

在当今免疫学领域，标记和鉴定不同类型的免疫细胞起着至关重要的作用。流式细胞术作为一种强大的技术，帮助我们对免疫细胞进行高度精细的分析，从而更好地研究免疫系统的功能和调节机制。不过在我们开始流式实验之前需要提前了解细胞亚群的标记物，了解抗原密度。很多流式实验初学者卡在这一步，只靠自己查阅文献，往往容易导致实验失败，浪费自己宝贵的时间。小编帮大家总结了主要的细胞亚群标记物，于内容较多篇幅所限，小编将内容分为上下两章，请各位随着小编一起来了解一些流式常用的免疫细胞标记物，希望对各位的流式实验有所帮助。

对照实验，或者对照组，是所有生物医学类实验中最重要的组成部分，决定最终实验数据有无统计学显著意义。特别是在流式等实验中，阳性对照、阴性对照和同型对照三组重要的实验设计直接关于科学实验的成败。AntibodySystem公司拥有卓越的供应链和最全面的产品线，是科研者赖以信任的抗体供应商，提供一系列流式实验相关抗体。本文以流式实验为背景带您深入探讨阳性、阴性、同型对照抗体这三类对照抗体的作用。