什么是流式细胞术？
Fig 1.流式细胞仪原理
1934年，Andrew Moldavan首次尝试使用光电探测器研究细胞在毛细管中流动，被视为流式细胞仪雏形，为后来流式技术奠定基础。数十年后，流式细胞术迅速发展。
1975年，George Kohler和Cesar Milstein提出单克隆抗体技术，推动流式细胞术进展。研究者获得针对白细胞的单克隆抗体，通过荧光染料标记为流式细胞研究打下基础。而这些早期单克隆抗体在生命科学研究和白血病等诊断中发挥重要作用。
近年来，流式细胞术在单克隆抗体研发和生产中得到广泛应用。相较传统技术如Western blotting、ELISA，流式细胞术拥有更高通量，更快分析样本中多目标表达。并且结合细胞表型标记，能精确分析特定细胞群和亚群，已成为研究免疫学不可替代的工具。
免疫细胞及常用标记物
免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子组成，其中，免疫细胞承担着免疫系统具体功能的主要职责。根据免疫应答的类型，它们分为固有免疫细胞和适应性免疫应答细胞。
固有免疫细胞包括多种类型，如巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞、NKT细胞、固有淋巴样细胞、粒细胞以及肥大细胞等。
适应性免疫应答参与的细胞主要是T和B细胞，它们表达着特异性抗原识别受体（TCR/BCR）。
在流式细胞检测中，免疫细胞标记物被广泛应用，以帮助鉴别和区分不同类型的免疫细胞。下面将为您介绍一些常见的免疫细胞及其在流式细胞检测中常用的标记物。
常见免疫细胞流式检测常用标记物
1
Leukocyte common antigen
CD45，又被称为白细胞共同抗原（Leukocyte Common Antigen，LCA），存在于除红细胞和血小板以外的所有造血细胞及其不同分化亚群上。它是常见的造血细胞标志物。
为了研究这些不同的表达情况，研究人员使用各种CD45抗体，包括CD45、CD45RA、CD45RB、CD45RO、CD45R等。这些抗体有助于识别和区分特定免疫细胞亚群，进一步深入探究细胞活性、分化状态以及免疫应答的机制。小鼠CD45的等位变异CD45.1和CD45.2分别表达于不同的小鼠谱系，多数小鼠谱系表达CD45.2（如BALB/c、C57BL小鼠），而CD45.1只在少数小鼠谱系（如SJL/J）中表达。CD45.1和CD45.2常被用于追踪骨髓移植后小鼠造血细胞的来源。
Fig 2.相同研究对象在不同种属中生物标记物不同
2
Haematopoietic stem cells
造血干细胞是一类具备高度自我更新能力和多能分化潜能的造血前体细胞，它们为血细胞的形成提供了基础，从而支持整个免疫系统的功能。
造血干细胞的主要表面标志物包括CD34、CD90和CD117，而不表达CD38、CD45RA以及其他与成熟血细胞谱系相关的表面标志。
在小鼠中，造血干细胞的关键表面标志物包括Sca-1和CD117。
这些表面标志物的识别与分析有助于我们准确地鉴定和分离造血干细胞，进而深入研究它们在造血过程中的重要作用。
Fig 3.Haematopoietic stem cells分化过程
造血干细胞经分化产生多种血液细胞，其中不包括红细胞和血小板的是白细胞。白细胞可进一步分为淋巴细胞（包括T细胞、B细胞和NK细胞）以及粒细胞（如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）。对于流式细胞实验中的研究对象为白细胞，一种常见的处理方法是使用红细胞裂解液来溶解血液中的红细胞。而如果研究对象是外周血单个核细胞（PBMC，或称无颗粒白细胞），则常使用Ficoll密度梯度离心的方法来分离PBMC，从而得到单个核的白细胞群体。
B cells
B细胞和T细胞是适应性免疫系统的重要组成部分，它们分别携带着特异性抗原识别受体（BCR/TCR），在免疫应答中发挥细胞免疫和体液免疫效应。此外，B细胞还在抗原呈递过程中发挥重要作用，并参与免疫调控的调节。在流式细胞实验中，常用的pan-B细胞标记物包括CD19和CD20。在小鼠中，CD45R（B220）在B细胞谱系细胞（但不包括浆细胞）上表达，因此被广泛用作小鼠pan-B细胞的标记物。
T cells
T细胞起源于造血干细胞的，它们在胸腺中经历发育过程并最终成熟。T细胞在适应性免疫中扮演重要角色，介导细胞免疫应答。用于标记全面T细胞的常见标记物是CD3。根据功能特性，T细胞可以主要分为辅助性T细胞、细胞毒性T细胞和调节性T细胞。从TCR类型角度看，它们又分为αβT细胞和γδT细胞。根据CD4和CD8的表达，T细胞可以被分为CD4+T细胞和CD8+T细胞，而这两者又进一步细分为不同的亚群。另外，根据其活化状态，T细胞还可分为初始T细胞、效应T细胞和记忆性T细胞。人类初始T细胞和记忆性T细胞的关键表型标记分别是CD45RA和CD45RO。
Fig 4.CD45RA和CD45RO流式分群结果
在T细胞的检测中，CD3是最常用的标记物之一。CD3最初出现在前胸腺细胞的细胞浆内，随着T细胞的成熟，细胞浆中的CD3逐渐减少，而开始在细胞膜上表达。某些克隆的CD3抗体（如OKT3、HIT3a、UCHT1、145-2C11）可以用于激活T细胞。而CD4和CD8则是辅助T细胞和细胞毒性T细胞的主要标志物。然而，需要注意的是，除了T细胞和胸腺细胞，CD4和CD8也在其他免疫细胞类型中有表达。例如，CD4不仅存在于单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞中，而且CD8也存在于NK细胞和树突状细胞中。
AntibodySystem
AntibodySystem Laboratories SAS是由ProteoGenix于2019年创立的独立品牌，专注于生命科学研究领域蛋白及抗体试剂研发生产。致力于为全球生命科学基础研究者提供高质量的蛋白，抗体产品，产品类别囊括传统多抗，经典内参抗体，标签抗体，高活性蛋白，invivo功能性抗体，低背景流式抗体，高特异性纳米抗体，特色小分子抗体，高质量磷酸化抗体，DNA/RNA抗体,PEG抗体等十余个系列;目前AntibodySystem旗下产品线涵盖48种病毒与超级细菌，寄生虫，肿瘤，老年痴呆，帕金森，变态与过敏反应，免疫抑制与免疫激活等多个领域。AntibodySystem Laboratories SAS团队开发出一系列高品质流式抗体，针对经典克隆号，以常规膜蛋白流式抗体为主，覆盖全系热门靶点。
|
Haematopoietic stem cells |
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|
Target |
Clone number |
CAT. |
Species |
|
CD34 |
QBEnd-10 |
FHD80720 |
Human |
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CD38 |
38SB19 |
FHD80820 |
Human |
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TAK-079 |
FHD80830 |
Human |
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|
CD117 |
SAA0043 |
FHC83110 |
Human |
|
B cells |
|||
|
Target |
Clone number |
CAT. |
Species |
|
CD5 |
5D7 |
FHC18820 |
Human |
|
H65 |
FHC18810 |
Human |
|
|
CD19 |
1D3 |
FHD10830 |
Human |
|
4G7 |
FMD10810 |
Mouse |
|
|
CD20 |
18B12 |
FMC90710 |
Mouse |
|
CD21 |
HB5 |
FHD36810 |
Human |
|
7G6 |
FMD36810 |
Mouse |
|
|
CD24 |
3B6 |
FHD65220 |
Human |
|
CD40 |
FGK45 |
FMD68910 |
Mouse |
|
CD69 |
SAA0031 |
FHG11610 |
Human |
|
CD72 |
W004 |
FHD48310 |
Human |
|
CD80(B7-1) |
IDEC-114 |
FHE03410 |
Human |
|
16-10A1 |
FME03410 |
Mouse |
|
|
CD86 |
PMP2B10 |
FHE33810 |
Human |
|
GL1 |
FME33810 |
Mouse |
|
|
T cells |
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|
Target |
Clone number |
CAT. |
Species |
|
CD3 |
SPV-T3a |
FHC27740 |
Human |
|
OKT3 |
FHC27730 |
Human |
|
|
UCHT-1 |
FHC27720 |
Human |
|
|
145-2C11 |
FMC27740 |
Mouse |
|
|
CD4 |
GK1.5 |
FHB95920 |
Human |
|
Hu5A8 |
FMB95910 |
Mouse |
|
|
CD7 |
3A1e |
FHC41820 |
Human |
|
CD8 |
G10-1 |
FHK18510 |
Human |
|
OKT8 |
FMB96030 |
Mouse |
|
|
CD25 |
ADCT-301 |
FHB95820 |
Human |
|
CD28 |
15E8# |
FHC83420 |
Human |
|
CD45RO |
UCHL1 |
FHC34020 |
Human |
|
CD62L |
HuDreg-55 |
FHD03310 |
Human |
|
CD137 |
LOB12.3 |
FMG11010 |
Mouse |
|
CD154 |
hu5c8 |
FHD85410 |
Human |
END
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