如何选择合适的一抗

一抗，即第一抗体，是一种能够与非抗体性抗原（即特异性抗原）特异性结合的蛋白，主要分为单克隆抗体和多克隆抗体两大类。一抗可以特异性地结合底物，识别出我们想要检测的蛋白。检测任何靶蛋白都有多种抗体可供选择，那如何进行一抗的选择呢？

1. 确定实验类型

根据实验种类选择合适的抗体，如WB、IP、co-IP、poll-down、IHC、ICC、ELISA、FCM分析等，抗体说明书会列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型。

如未提及并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证。如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

2. 确定实验样本的种属

确定自己实验所用样本的种属，如human、rat、mouse、pig、goat等。应选择物种相同或有交叉反应的抗体，因其氨基酸序列同源性较高，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应。

如样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过。可以通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy和NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。如果比对结果，证明同源性比较高的，也可以选择。

3. 分析样本蛋白的结构性质

分析样本蛋白的结构性质以选择合适的抗体。

1. 抗体是由各种不同免疫原去免疫宿主而制备得来，免疫原包括：全长蛋白、蛋白片段、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞。
2. 抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片段或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
3. 如果打算用FCM流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。

4. 特异性与灵敏度

一抗应能特异性识别目标蛋白，避免非特异性结合。同时，一抗的灵敏度也至关重要，它应能检测到实验中目标蛋白的浓度。查阅抗体生产商提供的数据或在数据库如CiteAb、Antibodypedia中查看抗体的验证信息，可以确认其在实验中的特异性与灵敏度。

5. 表位识别

抗体识别的表位应位于目标蛋白的保守区域，确保抗体在不同变异或剪接形式中的识别能力。根据研究目的，选择识别修饰或非修饰表位的抗体。

6. 实验操作条件

一抗的使用需考虑实验条件，包括温度、pH、缓冲液类型等，以确保抗体的最佳性能。

通过综合考虑上述因素，可以更合理地选择适用于你的实验需求的一抗，提高实验的成功率和可靠性。