常见流式样本的保存方法及注意事项
流式细胞术在细胞计数、抗原检测、细胞功能分析以及核酸检测等领域中具有广泛应用。相比其他检测方法，流式细胞术具有目标精准、指标量化、样本节约、高通量等优势。流式样本的制备和保存对实验结果的影响至关重要。以下为流式细胞术常见样本的保存方法及注意事项。
流式细胞术常见样本分类
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样本类型
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常见特征
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流体样本
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包括骨髓、外周血、体液（如胸水、腹水、脑脊液），细胞通常为单细胞状态，需要使用抗凝剂并裂解红细胞。
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体外培养细胞
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包括贴壁细胞和悬浮细胞。
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实体样本
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免疫系统组织（如胸腺、脾脏、淋巴结）以及非免疫系统组织（如肝脏、心脏、肺脏、胃肠组织等）。这些样本通常需要通过酶消化或研磨以制备单细胞悬液。
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流体样本的处理与保存方法
1. 外周血样本
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处理方法：采集新鲜样本并与抗凝剂充分混匀，注明样本采集的日期和时间。
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保存方法：使用不同抗凝剂的保存时长有所不同。乙二胺四乙酸二钾（EDTA）可稳定保存12-24小时，枸橼酸葡萄糖液可保存72小时，肝素钠则可保存48小时。
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注意事项：若需进行白细胞计数、分类或流式检测，应优先使用EDTA作为抗凝剂。
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应用：血液疾病的免疫分型检测、白细胞计数、形态学染色和分类。
2. 骨髓样本
3. 胸水、腹水、脑脊液样本
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处理方法：标准化操作收集样本。胸水和腹水可使用肝素钠或EDTA抗凝剂保存，脑脊液则需使用特定的培养基或转运基质。
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保存方法：胸/腹水在4℃可保存24小时，脑脊液可保存24-48小时。
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注意事项：脑脊液不适用抗凝剂保存，避免样本活性下降。
体外培养的细胞系处理与保存
实体样本的处理与保存方法
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样本类型
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处理方法
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保存方法与时长
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应用
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肝脏、心脏、脾脏等软组织
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筛网研磨法或酶消化法
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活体组织可在4℃保存24-48小时，单细胞悬液可在4℃保存24小时，固定细胞可用4%的多聚甲醛溶液固定，1%甲醛缓冲液重悬后保存一周。
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细胞分选、免疫细胞表型分析。
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淋巴结、软骨、实体肿瘤等硬组织
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酶消化法
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固定细胞保存方法同上。
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免疫细胞功能检测、分泌功能分析。
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总结
不同样本类型的保存和处理方式各不相同，正确的样本处理方案对于流式细胞术实验的成功至关重要。在设计实验方案时，研究者应根据样本类型和实验需求选择最优化的保存和处理方式，确保实验结果的可靠性和再现性。
