别再困惑了，Lin⁻ 标志物到底有什么用？

Lin⁻（Lineage-negative，谱系阴性)是一个细胞检测中的重要概念，用于标识不属于成熟免疫细胞的细胞群。Lin⁻ 细胞群体不表达常见的免疫细胞谱系标志物（如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞等），因此通常代表未分化的前体细胞或特殊的免疫调控细胞，例如 MDSCs（髓系来源的抑制性细胞）、造血干细胞或其他免疫抑制性细胞。这一筛选策略在免疫学和肿瘤学研究中有着重要应用。

在流式细胞检测中，Lin⁻ 是一组谱系抗体混合物，用于排除成熟免疫细胞，保留未分化的前体细胞或目标群体。具体来说，这些抗体靶向以下谱系阳性标志物：

■T 细胞：CD3
■B 细胞：CD19 或 CD20
■NK 细胞：CD56
■单核细胞/巨噬细胞：CD14
■粒细胞：CD66b

Fig 1.Lineage Cocktail 4 和 7-AAD 的双重筛选

通过这些抗体混合物，流式细胞仪能够检测并排除表达这些标志物的成熟细胞，只留下Lin⁻ 细胞用于进一步分析。

Lin⁻ 的实验流程
■抗体孵育：将一组专门针对成熟免疫细胞的抗体混合物（如 CD3 针对 T 细胞，CD19 针对 B 细胞，CD56 针对 NK 细胞等）加入到细胞样本中。将样本在 20-30 分钟内孵育，这样抗体能与成熟细胞上的特定标志物结合。

■流式检测与分析：把孵育好的样本放进流式细胞仪进行检测。仪器根据抗体发出的荧光信号，找到那些表达成熟细胞标志物的细胞（这些细胞会被标记为阳性）。

■筛选 Lin⁻ 细胞：剩下的就是没有绑定这些抗体的 Lin⁻ 细胞，它们是未分化的前体细胞或具有调控功能的免疫抑制细胞。这些 Lin⁻ 细胞代表的是目标细胞群体，比如造血干细胞（HSCs）或 MDSCs，用于接下来的分析。

Lin⁻ 在免疫和肿瘤研究中的应用
■MDSCs（髓系来源的抑制性细胞）研究：
MDSCs 是未成熟的髓系细胞，具有强大的免疫抑制功能。在分析 MDSCs 时，Lin⁻ 标志物能够排除 T 细胞、B 细胞等成熟免疫细胞，让研究者专注于这些未成熟的免疫抑制细胞。

■造血干细胞分析：
在造血干细胞研究中，Lin⁻ 筛选可以帮助排除已经分化的免疫细胞，从而识别和分离未分化的造血干细胞。

■肿瘤微环境的研究：
Lin⁻ 细胞在肿瘤微环境中往往代表未成熟的调控细胞，如 MDSCs，它们通过抑制 T 细胞和 NK 细胞的功能，促进肿瘤免疫逃逸和肿瘤进展。

简单来说，这个实验就像一个过滤器，用抗体把我们不需要的成熟免疫细胞筛掉，剩下那些没有被抗体“抓住”的细胞——即Lin⁻ 细胞，就是我们想要研究的对象。这些细胞常用于研究免疫抑制机制或干细胞功能。