骨髓来源抑制性细胞解决方案 MDSC cell Panel

MDSCs（Myeloid-Derived Suppressor Cells，髓系来源的免疫抑制细胞）源自骨髓中的造血干细胞（HSC），并在特定病理条件下由未成熟的髓系细胞分化而来。MDSCs 在癌症、感染和慢性炎症等环境中大量积累，对抑制免疫功能具有重要作用。

根据表型和功能特征，MDSCs 分为两大主要亚群：

■多形核 MDSCs（PMN-MDSCs）：与中性粒细胞相似，常见于肿瘤微环境。

■单核 MDSCs（M-MDSCs）：与单核细胞相似，参与慢性炎症的调控。

MDSCs 的发育过程涉及多个骨髓细胞谱系：包括普通髓系祖细胞（CMP）、粒细胞-巨噬细胞祖细胞（GMP）和树突状细胞前体（MDP）。在肿瘤和炎症环境中，未成熟的髓系细胞在促炎信号的作用下逐渐扩展，分化为功能抑制性 MDSCs。

Fig 1.髓系来源的抑制性细胞（MDSCs）的分化与积累（图源10.1038/s41590-017-0022-x）

MDSCs 的免疫抑制机制：

精氨酸酶（ARG1）和一氧化氮合成酶2（NOS2）上调：

■ARG1 和 NOS2 共同参与 L-精氨酸的代谢，抑制 T 细胞的活化和增殖。

■ARG1 和 NOS2 过阻断 T 细胞 CD3链的翻译，削弱 T 细胞的功能，并促进 T 细胞的凋亡。

免疫抑制性细胞因子的分泌：

■MDSCs 分泌多种免疫抑制性细胞因子，进一步抑制免疫系统的反应。

诱导调节性 T 细胞（Tregs）发育：

■MDSCs 通过促进 Tregs 的扩增，加强免疫系统的抑制状态，限制抗肿瘤免疫应答。

Fig 2.髓系来源的抑制性细胞（MDSCs）在免疫抑制过程中的分类及作用机制（图源10.1038/nri2506）

小鼠与人类 MDSCs 的标志物

小鼠与人类 MDSCs 在免疫系统结构、标志物表达、肿瘤微环境和实验条件上存在差异，导致它们在流式细胞检测和功能表现方面有所不同。小鼠 MDSCs 主要通过 CD11b+、GR-1+/Ly6G+ 检测，并根据 Ly6G 和 Ly6C 的表达水平区分为 PMN-MDSCs 和 M-MDSCs；而在人类中，MDSCs 以 CD33+、HLA-DR- 为主要标志物，并进一步细分为 CD14+ 和 CD15+ 亚群。两者均能分泌 IL-10、MMP-9、TGF-beta 1 和 VEGF 等免疫抑制因子。这些亚型通过不同的细胞因子和代谢途径在肿瘤微环境中发挥作用，支持免疫逃逸和肿瘤进展。此外，小鼠实验通常在控制环境中进行，而人类研究依赖患者样本，反映了更复杂的个体差异和肿瘤微环境。在流式实验和肿瘤研究中，必须充分考虑这些差异，以确保数据的准确性和可转化性。

特性	小鼠 MDSCs	人类 MDSCs
总标志物	CD11b+、GR-1+/Ly6G+	Siglec-3+/CD33+、HLA-DR-
细胞表面标志物	CCR2⁺、CD11b+/Integrin alpha M⁺、CD11c⁺、F4/80+/low IL-4 R alpha⁺、M-CSF R/CD115⁺、Ly-6G-/low、Ly-6Chigh	Lin⁻、CD11b+/Integrin alpha M⁺、CD14⁺、CD15⁻ CD66b+/CEACAM-8⁺、IL-4 R alpha⁺、HLA-DR-/low
亚群分类	PMN-MDSCs（中性粒细胞样） Ly6G 高表达 M-MDSCs（单核细胞样） Ly6C 高表达	CD15+ PMN-MDSCs（中性粒细胞样） CD14+ M-MDSCs（单核细胞样）
功能	抑制 T 细胞和 NK 细胞功能，促进肿瘤免疫逃逸
分泌因子	IL-10、MMP-9、TGF-beta 1、VEGF

MDSCs 流式细胞检测操作步骤

■样品准备
样本来源：从血液、骨髓或肿瘤组织中提取单细胞悬液。
血液样本：使用 EDTA 抗凝管收集外周血，加入红细胞裂解液去除红细胞。
组织样本：使用机械或酶解消化（如胶原酶）处理肿瘤组织、脾脏或淋巴结，获得单细胞悬液。
细胞计数：确保细胞浓度在 1-2 × 10⁶ cells/mL，便于抗体标记。

■抗体选择与孵育
选择抗体：根据目标 MDSCs 类型，选择以下常用荧光标记抗体：
小鼠 MDSCs：
CD11b+、GR-1+、Ly6G+、Ly6C+
人类 MDSCs：
CD33+、HLA-DR-、CD14+、CD15+
抗体孵育：
每个样本加入 100 µL 单细胞悬液，按照每百万细胞加入 1-5 µL 抗体。
在 4°C 避光条件下孵育 20-30 分钟。

■细胞清洗
用流式细胞缓冲液（PBS 或 PBS+2% FBS）清洗细胞 2 次，以去除未结合抗体。
离心：300-400g，5 分钟，弃去上清液。

■死细胞染色（可选）
使用 7-AAD、PI 或 DAPI 死细胞染料染色，排除死细胞对检测结果的干扰。
染色后再进行 PBS 缓冲液清洗。

■数据采集
仪器设定：根据抗体选择的荧光染料，调整流式细胞仪激光和检测通道。
常用荧光染料：FITC、PE、APC、PerCP 等。
采集细胞数：建议每个样本采集 10,000-50,000 个细胞，以确保数据的统计学有效性。

■数据分析
门控策略：
识别 CD11b+ 和 GR-1+ 作为小鼠 MDSCs。
对人类样本，以 CD33+、HLA-DR- 为核心标志物门控，并进一步分析 CD14+ 和 CD15+ 亚群。
数据分析软件：使用 FlowJo 或 FCS Express 等流式分析软件。
补偿与对照：设置荧光补偿，确保染料信号无重叠；同时使用阴性对照、单染色对照等。

■结果报告与展示
将 PMN-MDSCs 和 M-MDSCs 的比例和状态用散点图或直方图展示。
分析 T 细胞或 NK 细胞的活化或抑制情况，结合免疫抑制因子（如 IL-10、TGF-beta 1）水平，进行结果解读。