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货号
BLBP00001
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描述
肽N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶，主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。PNGase F可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖，及杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。 PNGase F 不会去除常见植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 岩藻糖连接的寡糖。
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生物活性
1个酶活力单位指在10ul的反应体系中，37℃条件下1小时从10ug变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量定义为一个活性单位（U）。 -
表达系统
E. coli -
种属
Elizabethkingia miricola -
蛋白长度
PNGase F is cloned from Elizabethkingia miricola and expressed in E.coli. -
预测分子量
37 kDa -
浓度
80000U/ml -
应用
去除糖蛋白的高甘露糖型N-糖链。 -
状态
Liquid -
保存溶液
20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol -
实验操作流程
在变性条件下进行 SDS-PAGE 的蛋白质去糖基化
1. 在水中加入 1~20μg 目标糖蛋白、 Glycoprotein Denaturing Buffer (10X) 1μl 至最终体积为 10μl。
2. 在 100°C 加热 10min 使样品变性。
3. 将样品在冰上冷却，离心 10 秒。
4. 加入 2μl 的 GlycoBuffer 2(10X)、 2μl 的 10% NP-40、 6μl 去离子水，总反应体积为 20μl。
5. 加入 1μl 的 PNGase F, 轻轻混匀。
6. 37°C 孵育 1h。
注意：糖蛋白的去糖基化可以通过 SDS-PAGE 上的凝胶移位来观察，去糖基化的产物比糖基化的底物移动的更快。
注意：糖蛋白底物的差异，可能需要延长孵育时间。
在非变性条件下进行 SDS-PAGE 的蛋白质去糖基化
1. 在水中加入 1~20μg 目标糖蛋白、 GlycoBuffer 2 (10X) 2 μl 至最终体积为 20μl。
2. 加入 2~5μl 的 PNGase F, 轻轻混匀。
3. 37°C 孵育4-24h。
注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加 PNGase F 的量和延长孵育时间。
1X Glycoprotein Denaturing Buffer 0.5% SDS 40 mM DTT
1X NP-40 1% NP-40 in MilliQ-H2O
1X GlycoBuffer 2 20 mM Tris,PH 7.5
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运输
蓝冰运输 -
别名
PNGase F，糖基肽酶F，N-糖苷酶 F，去糖基化酶，Peptide-N(4)-(N-acetyl-beta-D-glucosaminyl) asparagine amidase F
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SDS-PAGESDS PAGE for PNGase F
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Experiment-Example在变性条件下，糖蛋白经PNGase F在37℃酶切1h后的电泳检测图。
Lane 1:酶切后
Lane 2:酶切前
