调节性T细胞解决方案 Treg cell Panel

调节性T细胞（Tregs）是免疫系统中的一种特殊亚群，负责维持免疫稳态、抑制过度免疫反应，并防止自身免疫性疾病的发生。Tregs通常通过表面标志物CD4、CD25和细胞内转录因子Foxp3进行鉴定，Foxp3是Tregs功能的关键调节因子，决定了其免疫抑制能力。此外，Tregs还表达CTLA-4和PD-1等分子，参与其调节功能。Tregs通过接触依赖性机制（如CTLA-4介导的直接细胞接触）和接触非依赖性机制（如分泌抑制性细胞因子IL-10、IL-35和TGF-β）来抑制效应T细胞和抗原呈递细胞的功能，从而调节免疫反应。Tregs在维持免疫稳态、防止自身免疫、调节炎症反应以及肿瘤微环境中的免疫逃逸等方面具有重要作用。Tregs可以通过胸腺中的天然调节性T细胞（nTregs）或外周环境中的诱导性调节性T细胞（iTregs）分化而来。由于其在自身免疫疾病、移植耐受性和癌症治疗中的潜在应用，Tregs成为了当前免疫学研究的热点之一。

 

 

Fig 1. Regulatory T cell development. 

 

调节性T细胞（Tregs）相关标志物表达及功能
标志物	功能描述	Treg表达特性	备注
CD4	与MHC II类分子结合，主要在辅助性T细胞（Th细胞）中表达	广泛表达，非特异性，需结合CD25和FOXP3进行Treg识别	非Treg特异性，单独使用不能区分Treg
CD25	IL-2受体α链，参与T细胞活化	高表达于Treg细胞，但活化的效应T细胞也表达	需与FOXP3和CD127联合用于Treg识别
FOXP3	调节性T细胞的发育和功能必需因子	高度特异性，公认的Treg标志物	最敏感的Treg标志，关键功能基因
CD127	IL-7受体α链，与T细胞存活和增殖有关	在Treg中下调，FOXP3阳性细胞CD127低表达	与CD4、CD25联合使用可更精准识别Tregs
CD3	TCR复合体的一部分，所有T细胞都表达	非特异性标志，用于识别所有T细胞
GITR	TNF受体家族成员，涉及免疫调节	高表达于Tregs，影响Treg功能
CTLA-4	抑制T细胞活化，调节免疫反应	Tregs中高表达，发挥抑制作用
CCR7	介导T细胞迁移，影响淋巴系统中的T细胞定位	在Tregs中表达，介导其迁移和定位

Treg 细胞流式检测操作步骤

■细胞准备：

从外周血、脾脏或其他组织中分离单核细胞，使用 Ficoll 梯度离心法或其他分离方法获取淋巴细胞。

用 PBS 洗涤细胞，并将细胞重悬于流式缓冲液中（PBS + 1% BSA + 0.1% NaN₃）。

■细胞计数：

使用台盼蓝或自动细胞计数器计数细胞，确保细胞浓度在合适范围（1 × 10^6 个细胞/100 µL）。

■表面标记染色：

加入针对 CD4 和 CD25 的荧光标记抗体（如 FITC、PE 或 APC）。CD127 也可在此步骤中加入以提高 Treg 细胞的纯度。

按照抗体说明书的推荐浓度加入，并在冰上避光孵育 30 分钟。

■洗涤：

染色后，加入 2 mL 流式缓冲液，300-400g 离心 5 分钟，弃上清。

重复洗涤 1-2 次。

■细胞固定：

加入 1 mL 固定液（常含有甲醛），将细胞固定 20-30 分钟。这一步有助于保持细胞结构完整，并确保细胞内标志物（如 FoxP3）稳定。

用流式缓冲液洗涤细胞，300-400g 离心 5 分钟，弃上清。

■细胞破膜：

使用破膜剂（如 Triton X-100 或 Saponin）处理细胞，暂时破坏细胞膜的完整性，使抗体能够进入细胞内部与细胞内的目标分子（如 FoxP3）结合。

破膜时间一般为 10-30 分钟，具体时间视试剂说明书而定。破膜后用含破膜剂的缓冲液洗涤细胞。

■FoxP3 染色（细胞内染色）：

加入荧光标记的 FoxP3 抗体（如 APC 或 PE），按推荐浓度加入。

在冰上避光孵育 30 分钟至 1 小时。

使用破膜剂缓冲液洗涤细胞 2-3 次，去除多余的抗体。

■流式细胞仪检测：

将染色好的细胞重悬于 300-500 µL 流式缓冲液中。

在流式细胞仪上检测，首先进行细胞群的门控，排除双染和死细胞。

观察 CD4+CD25+FoxP3+ 或 CD127 低表达 的细胞群，区分 Treg 细胞。

■数据分析：

使用流式细胞分析软件（如 FlowJo、FCS Express）分析数据，确认 Treg 细胞的比例和功能状态。

比较 CD4+CD25+FoxP3+ 群体和 CD127 低表达细胞，确保数据一致性。

■注意事项：

FoxP3 检测的特殊处理：由于 FoxP3 是细胞内转录因子，需进行细胞固定和破膜步骤，确保抗体能进入细胞内部染色。

荧光标记选择：避免抗体的荧光信号重叠，确保不同抗体信号能被流式细胞仪正确区分。

细胞处理：染色和固定步骤应避光进行，以避免荧光信号衰减。

数据准确性：使用 CD127 低表达结合 CD4 和 CD25，可以提高 Treg 细胞的纯度和检测准确性。

 

流式产品推荐：

Human  Regulatory T cell
Target	Clone number	CAT.	Conjugate	Species
CD4	OKT4A	FHB95931	FITC	Human
CD25	ADCT-301	FHB95824	PerCP	Human
FOXP3	1A210	MHJ52503	APC	Human
CD127	MD-707	FHD19412	PE	Human

 

Mouse Regulatory T cell
Target	Clone number	CAT.	Conjugate	Species
CD4	GK1.5	FMB95911	FITC	Mouse
CD25	PC61/PC61.5.3	FMB95813	APC	Mouse
FOXP3	1A210	PMJ52501	PE	Mouse

 

其他相关产品：

Target	Clone number	CAT.	Species
CD3	OKT3	FHC27731	Human
GITR	hu6C8	FHJ89822	Human
CTLA-4	HL32	FHD17242	Human
CCR7	R707	FHD99512	Human
CD3	145-2C11	FMC27711	Mouse
GITR	DTA-1	FMJ89812	Mouse
CTLA-4	9D9	FMD17222	Mouse